真空採血管的技術特點及臨床應用

血液標本的

真空採血管

系列已成為主流，由於過去採血後血液自然凝固，血液從離心到測定放置時間長，影響分析結果和速度。為了迅速推進檢測技術的快速化，往採血管中新增分離膠，促凝劑縮短了血液凝固時間，血清（血漿）分離膠抗凝採血管的應用，為急診幹化學分析儀提供了更快速的檢測標本並在最短時間報告結果。同時減少了交叉感染等生物安全隱患，規範了檢驗科採血技術，提高了檢測標本的質量，方便了就診患者。但是，隨著分離膠促凝採血管等在臨床實踐應用不斷增加，出現許多誤區及使用中值得注意的有關問題，有必要對這些問題作一介紹。

一、材料的效能指標

自動化儀器的大量使用及血液的儲存對血樣原始性狀穩定性提出了更高的要求，使真空採血技術突破了僅僅只為安全的要求，而準確性、標本的原始性狀、維持時間及管機配合、試管強度等效能指標都不能忽視，影響標本原始性狀及檢測準確性的因素有如下幾項。

1。

真空採血管

的材質：以往採血管多為玻璃材料，普通玻璃的pH相差甚遠，溶血的可能性大大增加，而拉管工藝製作的玻璃試管線性溝密佈，深淺粗細無常導致細胞的掛壁，玻璃試管的主要成分是親水性矽酸鹽，採血後玻璃試管內壁可出現吸附水分子的吸水層，所以，分離膠不能直接黏附於玻璃試管的內壁。隨著放置時間的延長，紅細胞中的鉀或者酶等物質，可以透過水分子吸水層向血清中擴散。所以，玻璃採血管在原狀態下儲存血清的期限以2~3d為宜。塑膠採血管常用聚對苯二甲酸（乙二）醇酯（polyethyleneterephthalates，PET）材質製作，是疏水性質，其管壁不產生水分子層，分離膠可牢固地黏附著內壁上，紅細胞中的鉀不能擴散到血清中，因而冷藏儲存8d血清鉀含量不變。PET塑膠真空採血管可在-20℃儲存標本，這是普通塑膠試管和玻璃試管難以達到的。所以，在選擇真空採血管時儘量用PET塑膠採血管為佳。

2。密封膠塞：密封膠塞的質量直接影響到試管的真空效能及血液樣本的原始狀態，推薦使用丁基橡膠而不用天然橡膠，天然橡膠填料外滲嚴重，是一種可致溶血的材料，許多有機填料和助劑（包括石蠟油，矽油，柔軟劑，著色劑等）在真空狀態下會沿玻璃管壁往下爬，這類物質尤其影響真空乾燥的肝素類物質的水溶性而導致凝血。另外其氣透性及水透性也不符合真空管的技術要求，真空丟失嚴重，管塞結合部可見塞屑粘壁嚴重。而丁基橡膠具有良好的塞封效能，溶出物大大減少，使得采血管即便是在101。3kPa的負壓時仍能在24個月內保持真空恆定。真空恆定使採血物件即使有血壓及血液粘度的差別，以及採血環境溫度的變化仍能保持採血量的相對準確，實際採血量誤差可控制在±5%以內。

二、新增劑的正確使用

新增劑包括多種成分，如抗凝劑、促凝劑、緩衝劑、保護劑、分離膠等，其品種、效能、濃度直接影響血樣的性狀和檢測結果。真空採血技術則在品種、濃度方面做到規範一致，並能長期維持其有效性，使新增劑對檢測結果的影響降到最小。由於血液分析的多樣性，故抗凝劑的使用種類較多，抗凝及促凝原理，效果也不一樣，常用的有如下幾種。

1。血清管（紅帽）：採血管內不含抗凝劑，用於生化、血庫和血清學檢驗。有的內壁塗有矽酮，避免血細胞附壁，防止離心時細胞破碎，釋放細胞內物質至細胞外，影響試驗結果。由於這種採血管內無分離膠，血液從凝固到離心須在一小時以上已越來越不適應目前醫院繁重的工作量的需要，現在有逐步被帶分離膠促凝管所替代。

2。分離膠促凝管（黃帽）： 血清分離膠由疏水有機化合物和矽石粉組成，是具有觸變性的黏液膠體，其結構中含有大量氫鍵，由於氫鍵的締合作用形成網狀結構，在離心力的作用下網狀結構被破壞變為黏度低的流體，當離心力消失之後又重新形成網狀結構，這種性質被稱為觸變性（thixotropy）。即在溫度不變的情況下，對這種黏液膠體加一定的機械力，可從高黏度的凝膠狀態變為低黏度的溶膠狀態，如果機械力消失又恢復原高黏度的凝膠狀態。分離膠比重維持在1。05，血清比重約1。02，血塊比重約1。08，當分離膠與凝固後的血液在同一試管中離心時，由於對分離膠施加離心力而引起矽石凝聚體中的氫鍵網狀結構被破壞變成鏈狀結構，分離膠就成為黏度低的物質，比分離膠重的血塊就轉移到管的底部，分離膠發生返轉現象，形成管底部血塊、分離膠、血清三層。當離心機停止轉動失去離心力後，分離膠中矽石凝聚體的鏈狀粒子間再次由氫鍵構成網狀結構，恢復初始高黏度凝膠狀態，在血清和血塊間形成隔離層。血液促凝劑是為了臨床檢驗中快速分離血清標本而研製的促凝劑，一般常用矽石粉、玻璃粉、碳素粉末及蛇毒等促凝成分，經特殊加工製成粉劑用定量噴霧器均勻噴塗在血清分離膠真空採血管內壁上，達到快速促凝的目的。

3。肝素抗凝管（綠帽）：肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖，分子量15000，因有硫酸基團，帶有強大的負電荷“其抗凝原理為與抗凝血酶2（AT2）結合，使AT2的精氨酸反應中心更易與各種絲氨酸蛋白酶起作用，使凝血酶的活性喪失。常用其鈉、鉀、鋰鹽，100~125U/mg可使5~10ml血液不凝固。肝素是一種極佳的抗凝劑，對血液成分干擾少，不影響紅細胞體積，不引起溶血，適用於做紅細胞滲透脆性試驗。血氣、血漿滲透量、紅細胞壓積、血沉及普通生化測定”因肝素具有抗凝血酶的作用，不適於做血凝試驗。過量的肝素會引起白細胞的聚集，不能用於白細胞計數，因其可使血片染色後背景呈淡藍色，故不適於做白細胞分類。由於肝素不能使離體後的血小板離散，成為單個顆粒或細胞透過微孔，可造成血小板計數減低，白細胞計數及淋巴細胞計數偏高。商品肝素常含有磷酸鹽，可使無機磷測定偏高“肝素抗凝血應於短時間內使用，否則擱置過久血液又可凝固。

4。乙二胺四乙酸（EDTA）鹽管（紫帽）：EDTA與血液中的鈣離子螯合，從而使血液不凝，一般1。0~2。0mg可阻止1ml血液凝固。此抗凝劑不影響白細胞計數及大小，對紅細胞形態影響最小，並且可以抑制血小板的聚集，適用於一般血液學檢驗。抗凝劑濃度過高，滲透壓上升，造成細胞皺縮。EDTA溶液pH與鹽類關係較大，低pH可使細胞膨脹，EDTA-K2可使紅細胞體積輕度脹大，採血後短時間內平均血小板體積（MPV）非常不穩定，半小時後趨於穩定。EDTA-K2使鈣、鎂下降，同時使肌酸激酶（CK）、鹼性磷酸酶（ALP）減低，因這些酶測定需要這些金屬離子。EDTA-K3的最佳濃度是1。5mg/ml，如果血少，EDTA濃度增高，中性粒細胞會腫脹分葉消失，血小板會腫脹、崩解，產生正常血小板大小的碎片，使分析結果產生錯誤。EDTA依賴的IgM抗體可引起白細胞計數減少，同時造成血塗片時白細胞聚集。EDTA由於螯合鈣的作用強，使二磷酸腺苷（ADP）不能引起血小板聚集，另外EDTA能抑制或干涉纖維蛋白凝塊形成時纖維蛋白單體聚合，不適用於血凝及血小板功能檢查，亦不適用於鈣、鉀、鈉及含氮物質測定。

5。枸櫞酸鈉管（藍帽！黑帽）：抗凝原理為與鈣結合，形成可溶性鈣螯合物而使血液不凝。NCCLS推薦的血凝測定要求的抗凝劑濃度是3。2%或3。8%，相當於0。109或0。129mol/L，抗凝劑與血液的比例是1：9。大部分凝血試驗都可用枸櫞酸鈉抗凝，它有助於因子和因子的穩定。另外，用枸櫞酸鈉抗凝的血漿做活化部分凝血活酶時間（APTT）試驗，其對肝素的敏感性遠遠高於草酸鹽抗凝血漿，當APTT試驗用於監控接受肝素治療的患者時，這一點顯得非常重要。枸櫞酸鈉6mg才能抗凝1ml血，鹼性強，不適於血液化驗，亦不適於做生化檢測，枸櫞酸鈉對MPV及其他凝血因子影響極小，可用於血小板功能分析，血小板的聚集作用隨血漿中枸櫞酸鈉的濃度降低而增高，因此在貧血患者應加入較正常人為多的抗凝劑。對於血液凝固試驗來講，如果血液比例過低，APTT時間會延長，凝血酶原時間（PT）結果亦會有顯著改變。PT測定3。8%的抗凝劑比3。2%的國際標準化比值（INR）值高，其差別變化一般在0。7~2。7個INR單位之間。由於枸櫞酸鈉毒性小，也用於血液儲存，枸櫞酸鈉在水中溶解慢，故只能配成水劑而不能用粉劑。枸櫞酸鈉有2分子水（Na3C6H5O7。2H20）和5。5分子水（2Na3C6H5O7。11H2O）兩種，如用後者等滲濃度應為3。8%，但後者很難買到。抗凝劑濃度高，血沉快，若抗凝劑濃度恰當（無論枸櫞酸鈉或EDTA）均不影響血沉的結果，肝素可改變紅細胞的Zeta電位，使血沉加快，故不能使用。

三、

真空採血管

使用中應注意的幾個問題

1．

真空採血管

的選擇：應本著安全有效，質優價廉，保證檢驗結果穩定準確，減少病人負擔的原則去選擇適合自己醫院的產品。目前除了部分小廠的質量還不能達到使用要求外，許多國產的品牌的質量已經接近或達到同類進口產品的要求，而且更具價格優勢，很大程度上可以減少病人不少的醫療開支。所以我們不能一味追求或依賴進口產品，那些質量好價格優惠的國產品牌同樣可以勝任於日常的臨床應用。但是，在應用前必須進行小樣本量（至少100例）各種型別

真空採血管

必要的試用和評價後才能正式在臨床應用。

2。推薦的採血順序為凝血管（血清管）→枸櫞酸鈉管→肝素或EDTA管→草酸鉀2氟化鈉管→血沉管。主要原因是第一管內往往含有組織液，易造成凝血，不適於做血凝測定。

3。取血時患者應鬆弛，環境溫暖，防止靜脈攣縮，束膊時間不可過長，禁止拍打手臂，否則可造成區域性血液濃縮或啟用凝血系統。觀察採血是否順利，採血量是否符合要求。由於實驗室樣本量的不斷增加，傳統實驗室分離血清標本的速度與全自動化分析儀很不同步，因為血液凝固速度與玻璃試管和塑膠試管的啟用能力、溫度密切相關。實驗證明，凝血因子中的Ⅺ、Ⅻ因子接觸玻璃試管壁後被啟用，一般採血後在23~25℃室溫條件下，30min大部分血液已凝固，完全凝固需要1h。但是，疏水性的塑膠試管壁接觸凝血因子Ⅺ、Ⅻ時，被啟用的能力非常弱，需要2~4h血液才能完全凝固，影響了分離血清的速度。在採血試管內壁表面噴塗血液促凝劑才能解決上述存在的問題。採血後輕輕倒轉試管混合4~5次，置室溫立放待血液完全凝固後離心，血液呈現收縮狀態，可觀察到有血清滲出現象，證明血液完全凝固。

4．血清分離膠促凝採血管離心操作的要求：如何正確地使用分離膠促凝管制備高質量血清標本，血液完全凝固和離心條件是至關重要的兩個環節，離心要求採用水平式離心機。具體操作步驟是：採血後立即輕輕倒轉採血試管4~5次混勻標本，等待標本充分凝固需要放置30min，離心半徑8cm，離心速度維持在3500~4000r/min離心10min。血清與血凝塊完全被分離膠分離，血清標本可直接上機檢測或轉移至儀器配套試杯中。具備這個條件才能製備出高品質血清標本，說明分離膠效果好。如果離心速度過低，作用於分離膠的力比較弱，分離膠返轉不佳或者血液沒有完全凝固就離心，可出現纖維蛋白凝狀物停留在血清中或膠體層中，有可能引起溶血，除急診外普通生化檢查最好在血液完全凝固後離心效果交好。由於缺乏經驗，這種現象在實驗室初始使用分離膠凝採血管時經常發生，如果有纖維蛋白絲停留於血清中很容易阻塞自動分析儀採血針。目前許多國產分離膠質量已達到或接近國際水平，許多醫院的使用表明和美國BD公司等同類產品的分離時間，分離效果幾乎沒有區別。經用國產分離膠塑膠試管，對生化、免疫30多個專案是否影響測定值作了調查，用普通玻璃試管做對照並和美國BD公司同類產品進行比較實驗研究，兩者之間具有很好的可比性，結果無顯著性差異（均p>0。05）。

5。血液與抗凝劑的比例必須精確，抗凝劑在血標本中的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度進而影響實驗結果。鈣的絕對濃度越高，PT、APTT凝固時間越短。關於凝血試驗真空管”死腔“問題，有實驗表明真空管死腔會產生血小板活性增強（PF4活性增強）、APTT縮短現象的原因可能是多方面的，由於死腔啟用血小板是隨機偶然事件，目前尚未對其發生機理和機率有明確的認識。因此，在進行血小板功能試驗及監測APTT以指導肝素抗凝治療時對實驗結果產生的偏差。

綜上所述，真空管的普通使用對提高檢驗質量，防止生物安全汙染，規範抽血技術，提高工作效率等都有很大好處。但同時一定要注意品質的選擇，規範的操作和使用過程中的出現的問題