三級種與二級種有什麼區別?如何對傘菌類進行組織分離

細菌如何一分二

三級種也叫栽培種、生產中等，其常規制作及滅菌、培養等操作與二級種相同，二者主要區別在於所用種源不同：原種是用母種轉接而來，而栽培種則是用原種轉接而來。此外，在平菇、雞腿菇以及草菇等生產中，二級種大多使用500毫升廢舊罐頭瓶作為容器，而三級種多為聚丙烯膜塑膠袋。另外，在基質配方上，為了節約生產成本，栽培種多采取減少輔料中麥麩用量的辦法，甚至完全使用棉籽殼、玉米芯等作為主料，輔料則為少量化學肥料類以及石灰粉、石膏粉等。

菌種分離及其儲存法是一種利用子實體內部組織（菌肉、菌柄）、菌核組織或菌索進行分離後獲得純菌種的方法。食用菌的子實體實際上就是雙核菌絲的紐結物或集合體，它具有很強的再生能力，因此，只要切取小塊組織把它接種到適宜的培養基上，適溫培養，就能得到純菌絲體。這是一種無性繁殖方法，具有操作簡便、有利於保持原有品系的遺傳特性、分離成功率高等優勢。但是，該種分離所得到的菌種，退化速度快，因此，不宜傳代次數過多，一般繼代培養控制在3~4代內為宜。

組織分離是菌種分離技術中應用最廣泛的方法之一，由於其方法簡便、操作成功率高以及獲得的菌種不易發生變異等，被廣泛用於諸如野外採集野生種的分離、部分品種每年必做的選育性分離發現好的子實體後進行的緊急留種分離等，基本操作如下，傘菌類組織分離以香菇為例：器材準備，解剖刀或刀片、接種鉤（針）、PDA改良培養基、酒精燈、火柴、藥棉、記號筆以及75%酒精等。

選好種菇要求個體健壯、形態周正、特徵典型、無病蟲害，七八分成熟度、分離操作把待分離子實體切去部分菌柄基部，放到操作檯上；開啟接種淨化機；用酒精棉球擦洗手及手臂；灼燒接種工具、冷卻；10分鐘後，撕開子實體，從撕開的新斷面處選取菌柄最頂端的一塊組織，約3毫米×3毫米即可，不要碰到菌褶或斷面以外的任何部位，將之接種到PDA改良培養基斜面上，每管一塊；在外包紙上註明相應名稱、編號、時間以及操作人等。

平菇類品種撕開後，可選取大約菌柄與菌蓋交接處的一塊組織，操作同上。發菌培養將試管放入25℃條件下培養一般情況下香菇組織塊會分泌褐色色素，約一週後組織塊上長出白色絨毛狀菌絲，呈放射狀生長即為原始分離菌種。膠質菌組織分離以木耳為例：器材準備解剖刀、接種針、PDA改良培養基試管、無菌水、無菌紗布無菌燒杯、酒精燈、火柴、藥棉及75‰酒精等。

選擇種耳選擇開片好、耳片厚、富有彈性的健壯子實體，撕開成數片。分離操作接種淨化機開機10分鐘後，把耳片用無菌水沖洗乾淨，放於無菌紗布上吸乾水分，再用酒精棉揩擦消毒；用解剖刀將耳片層分割開，取耳片內部組織少許（注意不要切破耳片兩面皮層），接入到PDA改良培養基試管中部，每管一塊。實際操作中很有難度，今年我們在研發中使用將耳片鋪於操臺，解剖刀較大角度地斜向切割耳片，但不切破下面的皮層的方法，然後，用很鋒利的接種鉤勾取切開面中部位置一塊菌肉組織接入培養基試管，降低了操作難度，成功率較高，值得推廣。

發菌培養分離完畢後把試管放在27℃下培養，3~4天后能看到萌發菌絲。菌核組織分離方法以豬苓為例：1。器材準備同上。2。選擇種菇選擇較嫩、形態正常，表面無蟲斑、雜菌的灰苓或新鮮黑苓。3。分離操作分離選好種苓後，先將表面泥土雜物沖洗乾淨，擦乾後放到操作檯上；接種淨化機開機10分鐘後，用無菌水再行沖洗，用無菌紗布吸於水分，用酒精棉消毒種苓表面；用解剖刀把豬苓切開，取中間組織一小塊接種在PDA改良培養基上。發菌培養26~30℃下培養。

用菌核作為分離材料時，所挑取的組織塊應比本節上述中的傘菌類、膠質菌類所述的子實體組織塊大些，因為菌核組織是一個貯藏器官，其中大部分是貯藏物質，菌絲數量較少，若組織塊太小，分離不易成活，導致操作失敗。

菌索分離方法以蜜環菌為例：1。器材準備同上。2。選分離材料選取菌齡短、發育粗壯、無病蟲的菌索數根。3。分離操作在操作檯上，開機後，先將菌索附帶的泥土、雜物沖洗乾淨，吸於水分後用酒精棉消毒菌索表面，再用經滅菌的鋒利的解剖刀將菌鞘割破後小心剝去，注意不要切斷，把裡面的白色菌髓切斷，取一小段菌髓組織接入培養基斜面上。4。發菌培養，在23~25℃條件下培養如從土中取出菌索組織，由於其比較細小，分離較為困難，容易汙染。為提高分離的成功率，可在培養基中加入抗生素作為抑菌劑，實際操作為中常用氯黴素眼藥水。