培養基中氨苄西林含量的檢測方法

氨苄西林

又叫

氨苄青黴素

（Ampicillin）

。

配

LB培養基時，沒注意吧氨苄的量配成40mg/ML了，對培養基會有很大影響麼。。。一般用都是50 75 或者100

。

如果氨苄濃度過高酵母菌會死嗎

40mg/ml的量是相當的高哦！

我們實驗室

amp常用的工作濃度是100ug/ml，樓主的濃度顯然是高太多了

你用

40mg/ML的工作濃度還能長嗎？表示懷疑，如果是母液那更沒問題，按終濃度換算就行了嘛

培養基中的工作濃度如果是

40mg/ml，太高了，一般的工作濃度是20-50微克每毫升。20微克（嚴密型）50微克（鬆弛型）

氨苄在培養基中的

貯存濃度為

50mg/ml，工作濃度為60ug/ml。

在培養基篩選陽性克隆菌落時，培養基應該加多少濃度的氨苄西林？

有說

100μg/ml，有的說100mg/ml，還有的說1mmol/ml，到底多少呢？

是這樣的，我這是準確的，氨苄的平板工作濃度是

50微克每毫升，卡那的工作濃度是10微克每毫升，你照這個就可以了！

單位搞清楚就不影響了。

氨苄抗生素正常儲存濃度

100mg/ml=100ug/ul，常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加於生長培養基（稀釋用）。

知道相對分子質量，

mg/ml與mmol/ml這兩種濃度單位是可以相互轉換的，1 mmol/mL=1 M=1 g（質量）/M（分子量）/L。

氨苄的相對分子量大概

400，1 M的氨苄就相當於400mg/ml。

現要配

LB培養基 做PCR克隆用 從我同學那兒問到的是100mL LB培養基加入100ul 50mg/ml 的氨苄溶液，但是在網上查到有人是加100ul 50ul/ml 的氨苄，但沒說是多少LB培養基。

請問到底氨苄的用量應該是多少呢？

使用終濃度

50ug/mL 或者100ug/mL都可以

氨苄西林

（Ampicillin），通常簡寫成氨苄（Amp），是分子克隆中常用的陽性克隆篩選試劑，常配成100mg/ml儲液-20℃儲存，使用時按1L培養基加1ml儲液比例使用（Amp終濃度1mg/L），儲液配製方法如下：

試劑名稱：氨苄西林

（Ampicillin）

配製體積：

50mL

氨苄組份濃度：

100mg/ml

氨苄配製方法：

稱量

5g Ampicillin置於100mL燒杯（或50ml離心管）中。

加入

40mL滅菌水充分混合溶解後定容至50mL。

用

0。22μm濾膜過濾除菌。

1mL/份分裝後-20℃儲存。

100mlLB培養基加多少氨苄？液體培養基和固體培養基加的比例一樣嗎？

加多少要看情況，什麼菌？什麼目的？

有時候一樣有時候不一樣。細心一點可以做成不一樣的濃度，液體一般比固體低一些，但是要求不嚴格的實驗用一樣的濃度也沒太大問題。

最近學習分子生物中，配

LB培養基，要加多少氨苄抗生素，搜尋了好幾次（我ben），終於搞定了。需實驗器材：0。22mm過濾，針，高壓滅菌蒸餾水20ml，20個EP管，10ml定容，燒杯，玻璃棒等。烘乾後，取1g氨苄青黴素粉末，到燒杯，加水攪拌，定容至10ml，0。22mm過濾分裝至1。5EP管，我是每個試管500ul左右，-20°儲存。

100mg/ml的氨苄原溶液，培養基100ml，要求溶度為50ug/ml，要加多少原溶液咧。50ul氨苄原！

看了分子克隆，上面說對鬆弛型的質粒，工作濃度

50ug/ml。但是實驗室師兄說固體的要加倍？那意思就是要加到100ug/ml。

到底真實的情況是什麼啊？

標準

50， 用100也可以， 尤其是Amp配的時間較長了， 100 會更好，但這隻適用於一般的培養，質粒擴增等。具體的實驗要分析一下。

我們實驗室用的時候固體培養基工作濃度是

100ug/ml

培養時間不是特別長，或者被汙染的壓力不是特別大的話，

50ug/ml就足夠了，如果感覺不保險的話，加個一兩倍都沒問題。

REA

GEN

氨苄青黴素

藥物

酶聯免疫反應測試盒

可以快速的定量檢測培養基中

氨苄

西林的含量

氨苄青黴素

酶聯免疫反應測試盒基於競爭性酶聯反應原理，

微孔板上包被著

氨苄青黴素

抗原。分析時，樣品同

氨苄青黴素

捕獲蛋白一起混合加入孔中，如果樣品中含有

氨苄青黴素

藥物，會競爭捕獲蛋白，因而抑制板上包被的藥物抗原與捕獲蛋白結合。

HRP標記的二抗，與結合在板上捕獲蛋白相結合後，加入TMB底物，底物的顏色顯色強度與樣品中毒素的含量成反比。樣品中

氨苄青黴素

的殘留

水平

透過試劑盒中提供的標準品確定的標準曲線進行測定。

樣品處理方法

：

血清/血漿

,培養基

（1）

室溫（

22。5±2。5）°C下轉速4000rpm離心血清/血漿

培養基

樣品

15分鐘

；

（2）

用

1×

氨苄青黴素

提取液

進行

20倍稀釋上清液，（如10

L

血清

/血漿樣品

+190L

1×

氨苄青黴素

提取液

）

；

（3）

每孔取

50

m

L

樣品進行檢測

。

稀釋倍數：20.0

檢測步驟

（1）

加入

50

m

L的標準液或樣品於所設定的孔中；

（2）

每孔加入

100

m

L1×

氨苄青黴素

捕獲蛋白；

輕輕搖動微孔板混勻

1分鐘；

（3）

室溫（

22。5±2。5）°C避光

孵育

30分鐘；

（4）

洗板

3次，每次應該加入250

m

L 1×洗液，最後一次使板儘量甩幹並在吸水紙上吸乾；

（5）

每孔加入

1

5

0

m

L1×二抗（避免陽光直射和工作臺溫度過低，孵育時適當覆蓋微孔板）；

室溫（

22。5±2。5）°C

孵育

30分鐘；

（6）

洗板

3次，每次應該加入250

m

L1×洗液，最後一次使板儘量甩幹並在吸水紙上吸乾；

（7）

每孔加入

100

m

L的TMB底物；在室溫

（

22。5±2。5）°C

下培養

10-15分鐘，加入100

m

L的終止液終止反應，穩定兩分鐘後，在450nm下讀OD值（讀數前，用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指模）。

結果計算

（1）

分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值

（%） = （標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值）

100

（2）

以相對吸光度值為縱座標，標準濃度為橫座標建立標準曲線。

（3）

從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

（4）

樣品檢測下限和定量下限計算方法如下：

樣品檢測下限

= （

0。08

ng/g）

（稀釋倍數）

樣品定量下限

= （

0。2

ng/g）

（稀釋倍數）

例如，牛奶樣品的稀釋倍數是

10，所以牛奶的檢出限是

0。8

ng/g（ppb）（0。

08

ng/g

x稀釋倍數

20

），定量檢出限是

2。0

ppb（0。

2

ppb

x稀釋倍數10

）。

備註：如結果呈陽性反應，應該用其他檢驗方法（如色譜

/質譜方法等）進行確證。

以下曲線圖是氨苄青黴素

藥物

酶聯免疫反應

測試盒典型標標準曲線：

試劑盒參考圖片