微生物檢測實驗室的設施

一、微生物檢測實驗室的設施與裝置

①保證檢測的無菌環境設施與器械︰如潔淨室（無菌室）、無菌隔離系統、淨化工作臺等；②保證檢測用實驗用品與用具的無菌（滅菌）設施或裝置﹔如高壓蒸汽滅菌器、電熱恆溫乾燥箱等；③保證檢測細菌內毒素反應的器械用具∶如各種細菌內毒素反應測定儀；④保證檢測中微生物能恆溫生長與菌種儲存的恆溫裝置︰如恆溫培養箱、冰箱；⑤各種實驗操作所用儀器∶全封閉薄膜過濾裝置、電動勻漿儀、電熱恆溫水浴箱、離心機、天平、顯微鏡等；⑥實驗操作所用的玻璃器具∶各種刻度吸管、移液管、容量瓶、試管、三角燒瓶、雙碟培養皿等常用玻璃器具；⑦測量樣品中微生物菌落數或其他有關測量儀∶如空氣浮游菌取樣器、空氣懸浮粒子計數器等。

二、潔淨室(無菌室)

潔淨室（無菌室）是微生物檢測的重要場所與最基本的設施。它是微生物檢測質量保證的重要物質基礎。因此它的設計要按國家標準一2013《潔淨廠房設計規範》、國家藥品監督管理局頒發的《藥品檢驗所實驗室質量管理規範（試行）》中第十八條規定執行。

微生物實驗室潔淨室的施工、安裝、驗收應按國家標準GB 50591-2010《潔淨室的施工及驗收規範》執行。對於微生物檢測工作者和使用管理者來講，更大量的工作是進行正常管理到日常的使用。潔淨室（無菌室）的標準要符合GMP潔淨度標準要求。

1、我國GMP實施指南提出的潔淨室（無菌室）級別

2、潔淨室（無菌室）的使用管理要求

（1）潔淨室（無菌室）要符合規範要求

無菌室應採光良好、避免潮溼、遠離廁所及汙染區。面積一般不超過10m2，不小於5m2；高度不超過2。4m。由1～2個緩衝間、操作間組成（操作間和緩衝間的門不應直對），操作間和緩衝間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩衝間內應有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應放置培養箱和其他雜物；無菌室內應六面光滑平整，能耐受清洗消毒。牆壁與地面、天花板連線處應呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內不應安裝下水道。

無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區潔淨度100級或放置同等級別的超淨工作臺，室內溫度控制18～26℃，相對溼度45%～65%。緩衝間及操作室內均應設定能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔淨級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大於5Pa，潔淨室（區）與室外大氣的靜壓差大於10Pa。無菌室內的照明燈應嵌裝在天花板內，室內光照應分佈均勻，光照度不低於300lx。緩衝間和操作間所設定的紫外線殺菌燈（2～2。5W/m3）應定期檢查輻射強度，要求在操作面上達40uw/cm2。不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

（2）建立使用登記制度

微生物測檢驗室要建立使用登記制度。在登記冊中可設定以下專案內容：如使用日期、時間、使用人、裝置執行狀況、溫度、溼度、潔淨度狀態（沉降菌數、浮游菌數、塵埃粒子數）、報修原因、報修結果、清潔工作（檯面、地面、牆面、天花板、傳遞窗、門把手）、消毒液名稱等。

（3）建立使用標準操作規範（SOP）並嚴格管理

SOP內容至少要有以下幾點：

1）規定淨化系統的運轉時間要求：每次實驗前應開啟淨化系統使運轉至少1h以上，同時開啟淨化臺和紫外燈。

2）物品進入潔淨室（無菌室）基本要求：凡進入潔淨室（無菌室）的物品，必須先在第一緩衝間內，對外部表面用消毒劑消毒滅菌，再經物流緩衝間、傳遞窗1h以上，及無菌空氣吹乾後送入無菌室。注意帶纖維、易發塵物品不得帶進淨化實驗室。無菌室內固定物品不得任意搬出。

3）人員進入潔淨室（無菌室）要求：實驗人員進入潔淨室（無菌室）不得化妝、戴手錶、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。應清潔手後進入第一緩衝間更衣，

同時換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手後戴上無菌手套，換上無菌連衣帽（不得讓頭髮、衣等暴露在外面），戴上無菌口罩。然後，換上或再戴上第二副無菌手套，在進入第二緩衝間時換第二雙消毒隔離拖鞋。再經風淋室30s風淋後進入無菌室。

4）溫溼度觀察要求：觀察溫度計、溼度計上顯示的溫溼度是否在規定的範圍內，並作為實驗原始資料記錄在案。如發現問題應及時尋找原因，及時報修和及時報告實驗室主管，並將報修原因和結果記錄歸檔。

5）沉降菌落計數與浮游菌測定要求：在每次實驗同時，對操作室和層流臺做微生物沉降菌落計數，將結果記錄在使用登記本上，並作為實驗環境原始資料記錄在實驗報告上。每週1次，或在無菌檢查等必要時，在每次實驗同時對操作室和淨化臺進行浮游菌測定，將結果記錄在使用登記本上，並作為實驗環境原始資料記錄在實驗報告上。

6）消毒要求：無菌室每週和每次操作前用0。1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液擦拭操作檯及可能汙染的死角。

方法∶用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超淨臺的整個內表面、頂面以及無菌室、人流、物流、緩衝間的地板、傳遞窗、門把手。

消毒程式∶應從內向外，從高潔淨區到低潔淨區，逐步向外退出潔淨區域。然後開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1～2h，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面，除去室內溼氣，用紫外燈殺菌30min。

常用消毒劑的品種有：5～20倍稀釋的碘伏水溶液、0。1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液等。

所用的消毒劑品種與使用要進行有效性驗證方可使用，並定期更換消毒劑的品種。

尼泊金乙醇消毒液處方：對羥基苯甲酸甲酯21。5g ，對羥基苯甲酸丙酯8。6g，75%乙醇10。0ml。

7）其他要求：如遇停電，應立即停止實驗，離開無菌室。關閉所有電閘。重新進入無菌室前至少開啟機房運轉1h以上。

（4）潔淨度檢查的要求與方法無菌室在消毒處理後，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數，以此判斷無菌室是否達到規定的潔淨度，常有沉降菌和浮游菌測定方法。

1）沉降菌檢測方法及標準：以無菌方式將3個營養瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區檯面左、中、右各放1個；開啟平板蓋，在空氣中暴露30min後將平板蓋好，置32。5℃士2。5℃培養48h，取出檢查，3個平板上生長的菌落數平均小於1個。

2）浮游菌檢測方法及標準：用專門的取樣器，宜採用撞擊法機制的取樣器。一般採用狹縫式或離心式取樣器，並配有流量計和定時器，嚴格按儀器說明書的要求操作並定時校檢，取樣器和培養皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養基為營養瓊脂培養基或藥典認可的其他培養基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少於5min，調節流量、轉盤、轉速，關閉真空泵，放入培養皿，蓋上取樣器蓋子後調節縫隙高度。置取樣口取樣點後，依次開啟取樣器、真空泵，轉動定時器，根據取樣量設定取樣時間。全部取樣結束後，將培養皿置32。5℃±2。5℃培養48h，取出檢查，浮游菌落數平均不得超過5個/m3。每批培養基應選定3只培養皿做對照培養。無菌操作檯面或超淨工作臺還應定期檢測其懸浮粒子，應達到100級（—般用塵埃粒子計數儀）檢測，並根據無菌狀況必要時置換過濾器。

（5）定期進行潔淨度再驗證定期（每季度、半年、1年）或當潔淨室設施發生重大改變時，要按國家標準GB/ T16292—16294-2010《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》進行潔淨度再驗證，以確保潔淨度符合規定，儲存驗證原始記錄，定期歸檔儲存，並將驗證結果記錄在無菌室使用登記冊上，作為實驗環境原始依據及趨勢分析資料。並定期對潔淨室的環境檢測資料進行趨勢分析和評估，根據評估結果，瞭解潔淨室設施環境質量的穩定狀況及變化趨勢，決定是否有必要修訂相應的警戒和糾偏限度。

（6）定期更換新的紫外燈管、更換淨化系統的初效、中效、高效頭定期（至少每年1次）更換新的紫外燈管，以確保確保紫外燈管滅菌持續有效，並同時在使用登記本上做好更換紀錄，定期歸檔儲存。至少2年1次，或按潔淨度驗證實際情況，定期更換初效、中效、高效頭，以確保淨化系統的功能持續有效，並同時在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔儲存。

（7）使用過程中應儘可能減少人員的走動或活動平時實驗室內應儘可能減少人員的走動或活動，同向潔淨室的門要關閉或安裝自動閉門器使其保持關閉狀態。

（8）潔淨度不符合規定時立即停止使用發現潔淨度不符合規定時，應立即停止使用，尋找原因，徹底清潔，必須經潔淨度再驗證符合規定後才再使用，並同時將情況記錄在無菌室使用登記冊上，定期歸檔儲存。

（9）對進入的外來人員或維修人員進行指導和監督非微生物室檢驗人員不得進入潔淨室（無菌室），對必須進入的外來人員或維修人員要進行指導和監督。

（10）潔淨室（無菌室）的日常管理建立安全衛生值日製度，一旦發現通風系統、牆壁、天花板、地面、門窗及公用介質系統等設施有損壞現象，要及時報告並採取相應的修復措施，並儲存記錄及時歸檔。從潔淨室（無菌室）環境中檢測到的微生物應能鑑別至屬或種，保留鑑別實驗原始記錄及菌種，作為無菌生產、無菌檢查潔淨室環境質量、消毒劑有效性評估及汙染源調查的依據，並且也是為無菌檢查陽性結果的調查提供第一手資料。

三、區域性100級控制室

微生物檢測實驗室離不開對標準菌種以及所檢測的菌種進行各種處理，如轉接種、製備、鑑定、保藏和進行方法學驗證；或對培養基靈敏度檢查及陽性對照用菌株的接種以及抗生素效價測定用菌種的製備等；或必要時對樣品中檢出的或從潔淨環境中分離到的微生物進行分類鑑別，此外有些實驗還要自制生物製劑。這些活動就直接要接觸處理微生物菌種，如果菌種控制或操作不當，會導致實驗室環境汙染或菌種間交叉汙染。因此，菌種處理和微生物鑑別室必須與其他的微生物檢查用潔淨室嚴格分開。

區域性100級控制室通常應是由1個半無菌操作間和1個緩衝間組成的無菌室設施。室內安裝滅菌紫外燈。按實驗微生物性質的需要保持對該室的相對正壓或相對負壓。半無菌操作室的潔淨度要求為10000級，淨化層流臺作為操作時的區域性要求為100級潔淨度，必要時可改用生物安全櫃內進行，有關微生物暴露性棵作活動儘可能在生物安全櫃內進行。菌種處理和微生物鑑別室的環境檢測及使用管理的要求與潔淨室的基本要求相同。每次試驗結束後要對無菌室、層流臺或生物安全櫃及整個實驗室環境進行消毒，人員離開後，開啟紫外燈消毒。所有與菌種相關的試驗廢棄物均應經過滅菌處理（在121℃下處理30min以上）後方可丟棄。

使用管理中應注意制定與菌種處理相關的標準操作規程。此外，還包括生物安全櫃的使用標準操作規程、帶菌廢棄物的處理標準操作規程以及環境消毒等的標準操作規程。

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