丙酮酸激酶（PK）特性及測定方法（提供檢測試劑盒）

丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK），別名丙酮酸磷轉稱酶、磷酸丙酮酸激酶，其分子質量為：228kDa。在糖酵解系統裡，它是催化形成第二個ATP反應的酶。催化ADP為ATP的形成，結果是形成丙酮酸的終產物。

丙酮酸激酶使磷酸烯醇式丙酮酸和ADP變為ATP和丙酮酸，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，有M型和L型兩種同工酶，M型又有M1及M2亞型。M1分佈於心肌、骨骼肌和腦組織；M2分佈於腦及肝臟等組織。L型同工酶主要存在於肝、腎及紅細胞內。心肌細胞壞死後，PK釋放入血，PK的測定可用於診斷心肌梗死。

一、概 況

1。反應式

（Tris-緩衝液，pH7。4，30℃。） 最適pH為7。0~7。8。

2。米氏常數

3。專一性

在正向反應中，5‘-三磷酸腺苷（ATP）可用5-三磷酸尿苷（UTP），5’-三磷酸鳥苷（GTP），5-三磷酸胞苷（CTP），三磷酸肌苷（ITP）代替之。

在逆向反應中，兔肌丙酮酸激酶對PEP具很高專一性。迄今未發現此酶有其它有機底物。尚可使用其它一些輔助因子。若以5‘-二磷酸腺苷（ADP）的速度為1，那麼，5’-二磷酸肌苷（IDP）的相對速度為075，5-二磷酸鳥苷（GDP）為060，2-磷酸二羥丙酮（2-dAP）為011；5——磷酸腺苷（AMP）對此酶卻無活性。

4。啟用劑與抑制劑

此酶需要Mg2+（Mn2+或Co2+亦可）及K+（有時尚可用NH4+或Rb+來代替）作為啟用劑，以充分表現出活性。

5。純度要求

此酶作為試劑之用，每毫克蛋白至少應含200單位活性，而所含烯醇酶、L-乳酸脫氫酶（LDH）以及肌激酶（MK）的量應少於0。01%。

6。意義

此酶可作為分析試劑，用來測定PEP或ADP（LDH作為指示酶）、AMP（肌激酶作為輔助酶）、2-磷酸甘油酯（烯醇酶作為輔助酶）等生物物質。

在厭氧的糖酵解途徑過程，PK缺陷是引起溶血性貧血的主要因素。若患有丙酮酸激酶（PK）與6-磷酸-葡糖脫氫酶（G-6- PD缺症，能先天性溶性貧血症與非球形紅細胞溶血性貧血症。

若在紅細胞中（白細胞除外）發現此酶缺陷，則根據純合子來看，PK缺陷症與由於紅細胞破壞所引起的貧血症臨床圖譜是頗相一致的。此酶在血清中的正常值可達26單位/升，而在紅細胞中可達60~220毫單位/109紅細胞。若所測定的PK值為最大的話，則表示是由於溶血性貧血症引起的。

7。穩定性

此酶儲存在4℃時是很穩定的，經儲存12個月，其活性未出現明顯的下降。

二、測定方法

最常用的測定方法是：將此酶的逆向反應與LDH-NADH反應系統相偶聯，爾後，於340nm處測量吸光率的下降值。

丙酮酸激酶PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脫氫酶進一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和 NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PK活性。

此測定方法的變異係數為3%。目前尚未發現有干擾作用，即已知各種藥物或其它治療措施皆無影響。

此反應亦可用某種熒光方法［激發波長=365nm（Hg）發射波長=460nm］進行跟蹤。