技術指南 ｜ 微生物檢驗的質量控制

如何製備孢子菌懸液

在實際工作中存在許多複雜因素影響微生物學檢驗，可能給檢驗結果帶來偏差甚至錯誤，因此必須對影響檢驗結果的諸多因素採取控制手段保證檢驗結果的正確性，不斷完善微生物檢驗的質量控制。

檢驗人員

微生物檢驗不能完全依賴全自動鑑定儀器，檢驗工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力，與個人的經驗。技能和微生物檢驗基礎知識水平密切相關。

除要求微生物檢驗人員必須具備嚴肅認真的工作態度，精密細緻的觀察和操作習慣，注重個人衛生外，還必須訓練掌握微生物檢驗技術。

檢驗人員應執行上崗前培訓制度，上崗前培訓合格方能上崗操作，還要主動參加學習、培訓、講座，學習新技術，掌握微生物學檢驗方法，標準及相關法律法規。

參與編寫測試程式及儀器操作程式，學習質量保證體系知識和計量學基本知識。

參加各類水平測試和盲樣測試，提高檢測水平和分析問題，解決問題的能力。

微生物學檢驗室負責人應定期對檢驗人員進行專業知識和操作熟練程度的考核，提高檢驗人員的素質。

培養基

為保證乾粉培養基質量指標，在實際工作中應注意；

加強包裝的密封效能；

使用時儘量縮短開蓋時間；

一般乾性培養基放在低溫乾燥的環境中儲存，對於易受潮的品種，啟用後宜放入乾燥器中儲存；

由於配製水分不同，啟用次數或時間增加，乾粉培養基的pH值可能會有所變化，應隨時略加調整。

培養基的配製應嚴格按照標準規定的方法進行操作，並做好原始記錄。

為保證培養基必須在玻璃容器，搪瓷或鋁鍋中進行，如用銅，鐵器皿，會對微生物生長有毒害作用；

配製培養基時應按檢驗專案規定的配方新增，不得隨意增減或更改培養基成分。

要用專用的角匙取藥品，避免交叉汙染而影響檢驗結果；培養基配製最好用蒸餾水或去離子水，避免使用自來水，因其中含有氯等抗菌物質；

不同型別的微生物對pH值的要求不同，配製培養基時應測調值，如測定結果與所要求的值不符，則用1N NaOH或1N HCL溶液進行調節。

效果試驗是指按不同的培養基接種相應的菌株，觀察細菌的發肓，菌落形狀，色素，溶血等特徵，據此判斷培養基是否符合要求。

檢驗質量

除按國家標準方法對所需檢驗專案進行檢測外，在實際工作中還應注意以下幾個方面，否則會影響檢驗結果的準確性：

在定量檢驗時用重量法還是用體積法，檢驗結果會有誤差，因為此重不等於1的樣品，1ml和1g的化驗結果絕不會相等。一般固態的樣品宜用重量法，液體樣品宜用體積法。但對粘性液體（如酸奶），如用體積法，會粘附一定量的樣品在吸管上，因此此類樣品最好用重量法。

如檢樣需用用無菌水或無菌生理鹽水稀釋，則最好用均質器或組織碎機，以8000`10000轉/min的轉速處理1min，製成均勻的菌懸液。

樣品稀釋時，常會滯留少量樣品在吸管內外，應多加註意。吸入液體後，應沿管壁慢慢注入遞增的稀釋中，特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中。

在培養基注入檢樣，菌懸液時，注意培養基溫度宜在45℃-50℃ 之間，並使培養基與檢樣，菌懸液充分混合。

微生物培養時，應根據要求選擇正確的培養溫度和時間。

應用無菌水或無菌生理鹽水作空白對照，如果在空白對照中檢出細菌，則可認為培養基質量存在問題或在操作過程中存在汙染情況。另外，採用標準菌種作陽性對照，觀察培養基的質量情況。

整個檢驗過程應嚴格遵守無菌操作。

及時檢查結果，做好原始資料記錄。

參考菌株及其儲存

實驗室要準備好足夠種類和數量的參考菌株，滿足培養基，試劑盒和試劑質量測試的需要。儲存菌株要定期傳代，注意無菌操作，使菌株不汙染，不死亡，不丟棄。

應設專人妥善保管，菌株儲存箱應加鎖放置適宜環境，取出使用應登記；

儲存菌株應建冊登記，基本專案應包括菌種名稱、分離來源、分離日期、傳代日期、儲存方法、主要性狀、保管者、領用者等；

對儲存菌種，經傳代數次後應進行一次系統生化反應，，血清學期成績特性等生物學性狀觀察，檢查其是否發生變異。

菌種保藏的方法

定期移植保藏方法

將菌種接種於適宜的斜面或液體培養基，也可進行穿刺培養，等生長成健壯的菌體（對數期細胞，有性孢子或無性孢子）後，將菌種放置4 ℃冰箱保藏，每間隔一定時間需要重新移植培養一次。芽孢桿菌3-6個月移種一次，其它細菌每月移種一次。

液體石蠟保藏法

這種方法是定期移值保藏法的補充，在生長良好的斜面表面覆蓋一層無菌的石蠟，液麵高出培養基1cm，將其置試管架上以直立狀態低溫保藏，液體石蠟可以防止水分蒸發，隔絕氧氣，所以能延長保藏的時間。

沙管保藏法,土壤保藏法

麩皮保藏法

蒸餾水保藏法

液氮超低溫保藏法

甘油保藏法

冷凍乾燥保藏法

冷凍乾燥保藏法一般過程

安瓿管——-酸洗，水洗——-烘乾——滅菌

配製保護劑——分裝——滅菌

菌種——-培養——-製備菌懸液（加入2）——分裝安瓿管——預凍——真空乾燥——裝在歧管上抽真空——-火焰上熔封安瓿管口——檢測真空——保藏

［資訊來源：食品論壇］

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